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果糖-1,6-二磷酸酶測試盒微量法操作說明

更新時間:2021-04-27      瀏覽次數(shù):1085

果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)測試盒微量法操作說明
測定原理:

FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機(jī)磷,在反應(yīng)體系中添加的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下測定NADPH增加速率,即可計算FBP活性。

需要的儀器,耗材:

分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 測定意義:果糖-1,6二磷酸酶又稱果糖1,6二磷酸酯酶,催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機(jī)磷,在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關(guān)鍵性的作用。測定原理:

FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機(jī)磷,在反應(yīng)體系中添加的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下測定NADPH增加速率,即可計算FBP活性。需要的儀器,耗材:分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)測試盒微量法操作說明
樣本處理
組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻 漿。于 4℃,8000g,離心 10min,取上清,置冰上待測。

細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液), 冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min),于 4℃,8000g,離心 10min,取上清, 置冰上待測。

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